“你們一會兒還有課吧？”過了一會兒，錢餘開口問道。 兩人都點了點頭——在魚房裡待了一個多小時，二人依舊有些“意猶未盡”，可研一的學生還有課要上，特別是幾門必修課程，可不能輕易請假、缺勤，於是兩人隻能無奈地走出魚房。 “今天呢，就先簡單地跟你倆介紹一下魚房，下次帶你們進行實際操作，從配魚、收卵、胚胎養殖，再到幼魚、成魚，另外還有胚胎及幼苗觀察、成魚安樂死、魚體解剖等等。你倆跟一個周期，大概就能把這一整套斑馬魚的實驗流程弄清楚了。”錢餘認真負責，決心要帶師弟師妹們上手做實驗。 上午十點，兩人準時趕到教學樓——魏濼有英語課，而柳沅去上了一堂政治課。錢餘則返回實驗室，又跟著順際寧忙活了大半天。 吃過晚飯，錢餘回到宿舍，入門就看到研究植物的室友。那帥小夥正在椅子上“葛優躺”，全然一副累壞了的樣子。 “難得你這麼早回宿舍啊？”錢餘打了聲招呼，也走到自己的座位處，放下了書包。 “別提了，今天可把我給累壞咯。” 帥小夥所在的課題組研究擬南芥，其同樣作為一種‘模式生物’——擬南芥基因組小，個體小，結實率高，十分適用於遺傳實驗操作，可謂“植物界的果蠅”。 其實擬南芥的培養周期，在各類實驗植物中已經算很短了——從發芽到開花，隻需要4至6周，大約兩個月可收得種子。但這與細胞培養相比，依舊是“日久月深”，帥小夥總是有些忍不住眼紅，特別羨慕同宿舍那位研究細胞的室友。 “我今天帶著師妹搬營養土，又接著和了三十幾盆，還給兩個植物培養房裡的材料都澆上了水。” 帥小夥實驗室訂購的進口有機泥炭土，一包足足有200多升，將近40公斤。必須找兩三個人，使出‘吃奶的勁兒’才能搬得動。土壤一到貨，學生就要推著板車，將五、六包土搬上車帶至培養房的緩沖間，每次至少得上下來回兩三趟。雖說實驗樓有電梯可用，但這一搬、一推、一卸，總是費勁的。 待土歸置完畢，需要先將略微壓縮的土壤用手鬆化，再加入少許蛭石，均勻混合，接著進行分裝滅菌，以祛除各種菌類、蟲卵等。等到滅菌結束、土壤溫度降低，便稍加水和勻，將土填入種植盆中。滅好菌的一筐土，大概能填滿4至6個32穴孔的種植盆。 帥小夥今天一口氣給6筐土滅了菌，和滿了33盆土。待一一播完了種，他又把培養房的老材料移出，再將新盆搬入，最後往盆底灌水。可惜培養房內不設水源，隻好提一個兩至三升的塑料桶，到外間裝滿水後，再往植物房裡抬。一盆材料需加一兩勺水，頗費臂力。 這樁樁件件，可都是純體力活兒。 “要是誰家裡經常買花泥種花，應該就能體會‘腰酸背痛’的感覺咯……隻怪實驗室這一屆沒有招男生，唉——現在隻能把女生當男生用啦！”帥小夥無奈搖頭，“可好歹我是當師兄的，也得學會憐香惜玉不是？” 帥小夥接著打了個嗬欠，一臉疲憊：“不過招師妹也有好的地方，女孩子一般都更為細心，我也能放心地把材料交給她們照顧。” 與魚類相比，擬南芥作為植物，可算是半個“死物”——植物不能像動物一般，自行來去，它們在細胞層麵的“向性運動”，也無法將自身帶離原地。因此，植物對於環境的脅迫更為敏感。 “擬南芥的病蟲害還是挺常見的，哪怕是長在溫室裡，也時常會遭遇蚜蟲、紅蜘蛛等。有時候澆多了水，或者空氣潮濕，則易發白粉病；若此時恰好遇到批次不好的泥炭土，可能連土壤表麵都會長一層黴菌。”帥小夥說著說著，越發有些不適，趕緊搓了搓手臂上起的雞皮疙瘩，“要是哪天泥土‘長了蘑菇’，這同一批次播種的擬南芥啊，可就一盆都別想留下咯。” 材料養不好，就別妄想用來做實驗了。 談及病蟲害，錢餘卻認為，飼養斑馬魚需要麵臨更多的挑戰，包括寄生蟲、細菌類、真菌類，以及其它非感染類的先天疾病等。有時水質不佳，也會導致斑馬魚急性中毒。 每一位進入魚房的學生，都不應患有‘人魚共患’的疾病，例如腸炎弧菌、沙氏桿菌、線蟲病等，感冒、咳嗽者也需慎入。錢餘今後還要另尋時間，給魏濼和柳沅加大科普力度…… 同樣擔心實驗材料染菌、染病的，自然也少不了培養細胞的陳幸。 細胞培養技術是一種體外實驗，在無菌的環境裡，在一定的營養條件下，配合適宜的溫度、酸堿度、滲透壓等，讓細胞正常生長、繁殖，可以培養動物、植物，以及微生物細胞。其中，動物細胞的離體培養須使用血清——其作為營養液，提供細胞生長的各種必需因子。 “這養細胞呀，最怕的就是染菌了——細菌、真菌、支原體、病毒等汙染源，可能來自實驗室環境、實驗人員自身、實驗器械、試劑等等，最終導致細胞樣品無法使用，所以我們必須嚴格遵守操作程序。” 這天晚上，陳幸正好進行細胞傳代實驗，於是順帶著給新來的師弟師妹“露一手”。 “這是人乳腺癌細胞MCF-7，這一批的生長密度已經達到80%，可以進行傳代培養了。” 當細胞長成基本飽和的致密單層，便可進行“傳代”，即細胞的“分瓶再培養”，使其有空間繼續生長。傳代也是保存細胞株係的一種方法，但一般隻培養到第10代，以保證其正常的增殖能力、遺傳完整性等。 “你們上實驗課應該都實踐過，要是有哪一步記不清了，我這實驗記錄本上有大致的步驟，你們先看一看。”陳幸攤開本子，“細胞培養是無菌操作，一會兒我就不便開口說話了，以免染菌。” 師弟拿過記錄本，和師妹一塊兒翻看著：“我倆先在‘生物安全櫃’外邊觀摩，‘小師妹’師姐，你就給我們‘打個樣兒’唄。”師妹聞言也連連點頭，忙從實驗服的口袋裡掏出小本子和筆，準備就緒。 陳幸隻能無奈地笑了笑：“叫‘師姐’不就行了，還有必要加前綴嘛……” “嘿嘿……”兩人也不好意思地笑了——這不是低年級的都叫順口了，一時也改不回來咯。 陳幸倒不是很介意，反而繼續說起了細胞培養的注意事項：“先將水浴鍋預熱至37℃，將無菌的培養瓶、離心管、吸管等放入生物安全櫃中，經紫外線照射30分鐘，並用75%的酒精擦拭臺麵。” 師妹埋頭記錄，不一會兒就抬頭問道：“我記得之前實驗課教過，‘懸浮型’細胞可直接分瓶，若有細胞‘貼壁’，則需先用胰酶消化……不知道這個MCF-7細胞傳代，具體怎麼操作呀？” “這MCF-7細胞呀，是從一位69歲白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中得到的，具有已分化的乳腺上皮特性，所以正常情況下，它是上皮細胞樣、貼壁生長，屬於乳腺腫瘤乾細胞，理論上能夠自我更新、無限增殖。” 陳幸繼續說道：“其實在各類乳腺癌細胞中，MCF-7算是一種生長緩慢的細胞係。在我們實驗室的體係裡，通常呀，復蘇後前2代的細胞貼壁比較慢——大概需要5至7天，才能增殖到符合傳代的密度。MCF-7前期形成鬆散的‘三維團簇結構’，然後逐漸生長為扁平的單層細胞。這期間會出現少許懸浮的活細胞，需要進行離心操作，將其回收培養。” “MCF-7細胞在培養36至72小時內迅速增殖，到了第3代往後，傳代周期大概是3至4天，通常最快一周可傳代兩次。所以呢，差不多每周更換兩到三次培養液，平均每3天換一次。” “我們養細胞用的是‘完全培養基’——這些你們在課上都學過了吧，就是在含有基礎營養物質的培養基裡再加入牛血清、抗生素等物質。MCF-7細胞的培養液裡至少含有10%的血清，每毫升培養液中還加入了0.01毫克的人重組胰島素……” 就這1周至少傳1代的頻率，就算是“生長緩慢”的了，那生長快的細胞要“高速”成啥樣？難怪錢餘的室友——帥小夥是如此地羨慕。 “今天做的這一批，已經是第4代了。”陳幸開始講起了操作，“先將培養基、PBS緩沖液、胰酶放入水浴鍋，通通預熱至37℃。” “你們的值日表也排出來了吧？”陳幸插了一句嘴，“每周的值日生要負責配試劑，不可以偷懶哦。” 試劑配製包括實驗使用的滅菌蒸餾水、各種緩沖液、抗生素溶液、酶溶液的製備等，若有材料、試劑短缺，必須及時通知管理員訂購。值日人員還要打掃衛生，保證實驗環境良好……其中最重要的當屬各類試劑的製備——值日生必須盡職盡責，保證每一位實驗人員都能用得放心。 幾分鐘後，陳幸用75%的酒精消毒了雙手，點燃安全櫃內的酒精燈。然後將水浴鍋中預熱好的試劑拿出，均勻地噴灑上酒精，再移入安全櫃中放置。再次消毒雙手，陳幸徹底進入安全櫃工作區，便開始傳代實驗： 她先用吸管吸走舊培養瓶中MCF-7細胞的培養液，加入PBS緩沖液清洗兩次，再吸去潤洗的PBS，接著陳幸往瓶中加入胰酶，充分接觸細胞表麵。 師弟師妹站在陳幸身後，對應著她筆記中的要點，認真觀察她的每一步操作： 「MCF-7細胞傳代——消化法： PBS洗滌細胞10～20秒，動作要小心、輕柔，全麵清洗。 胰酶消化要充分，靜置1～2分鐘後，顯微鏡觀察細胞形態。 細胞回縮、變圓、離散、有脫落趨勢，找書苑 www.ｚhaoshuyuａn．com 加培養液終止消化。」 過了一會兒，陳幸便用‘倒置顯微鏡’觀察細胞的消化情況。待時機成熟，她立即加入培養基，與胰酶混勻，再吸走混合液。 接著，陳幸換了新的吸管加入培養液，使細胞懸浮，然後離心。棄上清液後，再次加培養基懸浮細胞，混勻，最後便可進行分瓶培養。 師弟對照筆記中的重點，也在自己的小本子裡記錄著： 「製細胞懸液不可產生氣泡； 離心時要保證離心機平衡； 通常以1:3的比例接種傳代，必要時需進行細胞計數； 注意更換吸頭、吸管，避免細胞交叉汙染。」 三人都默不作聲，房間裡安靜得仿佛能聽到針掉落的聲音。後頭的兩人目不轉睛，生怕漏掉一絲細節…… 最終，陳幸打破了寧靜：“將新傳代的細胞放入二氧化碳培養箱中，培養條件是37℃、5%濃度的二氧化碳。最後再把安全櫃收拾收拾，就大功告成啦！” “有哪一步不清楚的就問我，你們回去花點兒時間，整理一下實驗步驟。”陳幸又帶兩人看了看細胞培養箱，鼓勵道，“明天我讓你倆都上手試試……” “走，帶你們去看看我養的鼠。”陳幸興致正濃，“這細胞實驗啊，充其量都隻是‘體外’數據，隻有經‘體內’實驗獲得的結果，才更具有說服力。” 體內實驗，必須得找與人類基因同源性高的哺乳動物開展——“鼠”自然當之無愧，它們也早已是科研界的“寵物”。